dgge需要用顶层胶和底层胶吗如果需要浓度是多少

DGGE *作步骤1.将海绵垫固定在制胶架上,把类似‘三明治’结构的制胶板系统垂直放在海绵上方,用分布在制胶架两侧的偏心*固定好制胶板系统,注意一定是短玻璃的一面正对着自己.2.共有三根聚乙*细管,其中两根较长的为15.5cm,短的那根长9cm.将短的那根与Y形管相连,两根长的则与小套管相连,并连在30ml 的注射器上.3.在两个注射器上分别标记‘高浓度’与‘低浓度’,并安装上相关的配件,调整梯度传送系统的刻度到适当的位置!4.反时针方向旋转凸*到起始位置.为设置理想的传送体积,旋松体积调整旋纽.将体积设置显示装置固定在注射器上并调整到目标体积设置,旋紧体积调整旋纽.例如16*16cm gels(1mm thick)：设体积调整装置到14.5.5.*两种变性浓度的丙*酰*溶液到两个离心管中.6.每管加入18 μl TEMED,80 μl 10%APS,迅速盖上并旋紧帽后上下颠倒数次混匀.用连有聚乙*管标有‘高浓度’的注射器吸取所有高浓度的胶,对于低浓度的胶*作同上.7.通过推动注射器推动杆小心赶走气泡并轻柔地晃动注射器,推动溶液到聚丙*管的末端.注意不要将胶液推出管外,因为这样会造成溶液的损失,导致最后凝胶体积不够.8.分别将高浓度、低浓度注射器放在梯度传送系统的正确一侧固定好,注意这里一定要把位置放正确!再将注射器的聚丙*管同Y 形管相连.9.轻柔并稳定地旋转凸*来传送溶液,在这个步骤中最关键的是要保持恒定匀速且缓慢地10.小心插入梳子,让凝胶聚合大约一个小时.并把电泳控制装置打开,预热电泳缓冲液到60℃.11.迅速清洗用完的设备.12.聚合完毕后拔走梳子,将胶放入到电泳槽内,清洗点样孔,盖上温度控制装置使温度上升到60℃.13.用注射针点样.14.电泳（200V,5h）.15.电泳完毕后,先拨开一块玻璃板,然后将胶放入盘中.用去离子水冲洗,使胶和玻璃板脱离.16.倒掉去离子水,加入 250 ml 固定液（10% 乙醇,0.5% 冰醋*）中,放置 15min.17.倒掉固定液,用去离子水冲洗两次,倒掉后加入 250 ml 银染液（0.2% AgNO3,用之前加入 200μl 甲醛）中,放置在摇床上摇荡,染色 15min.18.倒掉银染液,用去离子水冲洗两次,倒掉后加入 250 ml 显色液（1.5% NaOH,0.5% 甲醛）显色.19.待条带出现后拍照.希望我的回答对您有所帮助。